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讨论与分析酶底物法应用的优势与不足
添加时间:2017-08-29
  
  目前我国对生活饮用水进行卫生学评价 ,检测的微生物指标主要有大肠菌群、耐热大肠菌群、大肠埃希菌 ,这类指标是粪便污染的指示菌。经典的传统方法为多管发酵法 ,其检测周期较长 ,需 2 ~5 d,阳性结果需验证试验 ,使得实验操作步骤较为繁琐 ,不能对生活饮用水的卫生学状况做出快速评价 ,特别是在抗震救灾特殊时期 ,如能实现微生物指标的实时监测 ,将极大地支持抗震救灾工作的顺利实施 ,有力保障广大灾区人民群众生活饮用水的供水安全。因此 , 酶底物法作为一种快检方法 ,其快速简便的特点可以较好的弥补传统方法的不足。
 
  酶底物法 ( enzyme substrate technique)的原理是 :利用大肠菌群细菌能产生β2半乳糖苷酶 (β2D2galactosidase)分解 ON 2PG (O rtho2 nitrophenyl2β2D2galactopyranoside ) 使培养液呈黄色 ,检测水样中是否含有大肠菌群。利用大肠埃希菌产生 β2葡萄 糖 醛 酸 酶 ( β2glucuronidase ) 分 解 MUG ( 42 methyl2umbelliferyl2β2D2glucuronide)使培养液在波长 366 nm紫外光下产生蓝色荧光 , 检测水样中是否含有大肠埃希菌。酶底物法有商品化试剂供应 ,实验操作简便 ,无需确认试验 ,可同时检测水样中大肠菌群和大肠埃希菌。如果改变培养温度 ,还可检测耐热大肠菌群。该方法检测周期短 , 18 ~24 h 即可报告最终结果。可见该方法最大的特点是节省了时间和人力。
 

  酶底物法应用的优势:

 
  准确可信
 
  使用MPN法进行定量检测,可直接检测100毫升水扬中0-2419MPN目标细菌
 
  精确检出100ml水样中单个的活性大肠杆菌群和大肠埃希氏菌,假阴性低
 
  每个单位试剂可抑制上百万个异养细菌,假阴性低
 
  无需验证,准确性高于滤膜法及多管发酵法
 
  符合中国国家标准GB/T5750.12-2006《生活饮用水检验标准》
 
  简单快捷
 
  检测时间不超过24小时,无需验证试验
 
  简单培训就能轻松使用,手工操作少于一分钟
 
  不会因为过滤阻塞(滤膜法)或异养细胞的干扰(多管发酵法)而产生数据误差
 
  无需玻璃器皿清洗及菌落计数,减轻实验人员工作量
 
  适用于大量样品的批量快速检测

 

  酶底物法的主要缺点

 
  培养基成分复杂 ,实验室配制困难 ,目前只有进口试剂可供选择 ,使得检测成本大为提高。如果能实现试剂的国产化 ,相信其应用会得到极大地推广。
 
  对于污染比较严重的生活饮用水 ,酶底物法的定量检测能力不如多管发酵法。遇到这类情况时如需应用酶底物法 ,则只能先将水样适当稀释后再进行检测。
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