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水中菌落总数快速检测方法-酶底物法与平皿计数
添加时间:2019-09-25
  

摘要:提出水中菌落总数酶底物检测方法,通过实验室间比对、实际水样检测,比较酶底物法与平皿计数法用于水中菌落总数的检测结果。实验结果表明该两种检测方法用于水中菌落总数检测的结果具有一致性,无统计学意义的差别。酶底物法可以用作评价水质微生物污染的标准依据。

  我国对生活饮用水、水源水、地表水等进行卫生学评价时,菌落总数(Totalcoliforms)是判定水质被细菌污染程度的重要指标之一。菌落总数的测定方法有国家标准测定方法和快速测定方法。平皿计数法是目前水中菌落总数的标准检测方法,其应用研究较多,如钱冬梅应用平皿计数法测定了生活饮用水的菌落总数,这种方法设备简单,试验步骤较为繁琐,对操作人员专业水平要求较高,不利于应急检测,和对水的卫生学状况做出快速评价。采用测试片法对自来水、游泳水等水质以及食品中的菌落总数进行了测定,并与倾注培养法进行了对比,结果显示两方法无差异,可应用于日常卫生检测工作。酶底物法(立科)检测水中菌落总数具有操作方便、准备简单、快速;干预性少、读数范围宽、结果容易判断等特点,适用于水中菌落总数快速检测。

  本文采用酶底物法对水中菌落总数进行快速检测,该方法操作简单,结果判读容易、准确,无需稀释即可检测738个/1mL水样,不仅适用于水源水、饮用水的检测,还适用于应急检测和污水检测,易于推广,可以较好的弥补传统方法的不足。

  1实验部分

  1.1原理

  复合酶技术培养基一立科检测菌落总数培养基采用立科酶底物技术)。该试剂包含多种独特的酶物质,每一种都针对不同的细菌酶设计,且已包含最普遍的介水传播的细菌,所有的酶底物在被分解时均产生相同的信号。水中存在的细菌能够分解一种或者多种酶基质然后产生一个信号,在检测菌落总数时,这个信号即为365nm紫外4O城镇供水NO.22013灯下的荧光。

  1.2材料与试剂

  立科定量盘;lmL移液管或移液枪;10mL移液管或移液枪;培养箱(35±1);6瓦366FIITI紫外灯;

  紫外灯箱(23cmx30onx17on1);无菌水。colitech培养基由西安立科环保科技澳洲幸运10计划APP提供;菌落总数标准试剂为美国ERA盲样标准。

  l_3方法步骤

  1.3.1首先向100mL装有固体培养基的瓶中加入无菌水至刻度,摇匀,制成液体培养基。该液体培养基应放置在冰箱中保存(℃左右),使用有效期为5d。见图1。

  1.3.2取1mL水样及9mL液体培养基倒入立科定量盘中。见图2。

  1.3_3将定量盘盖好,在水平桌面上旋动将所有水样分配到定量盘的孔中(孔中的气泡不会影响结果)。

  见图3。

  1.3.4将定量盘竖起(90。),将多余的水样由盘内海绵吸收。见图4。

  1.3.5将定量盘缓慢翻转过来,于培养箱中(35±0.5)培养48h(若结果为可疑阳性可延长培养时间至72h)。见图5。

 

  1.3.6计数:培养完成后将培养盘盖打开,用紫外灯在定量盘上方13on处照射,数显荧光的孔数。对照MPN表(见附表)得出结果。注意:海绵条显荧光不必记录在读数范围内。由于本方法的最大检测上限为738MPN/mL,如需稀释时,将结果乘以稀释倍数即为报告读数(如稀释l0倍时的操作为:加入0.1mL样品和9.9mL液体培养基)

  2.结果与分析

  2.1盲样比对实验--T检验分析

  选取北京、上海、温州3家国家级水质检测实验室对比同一盲样(标准试剂)进行酶底物法和平皿计数法比对试验,具体试验结果如图6

 

  对比以上酶底物法和平皿计数法检出共160个结果进行配对T检验,两种方法的配对T检验结果如下表1.

  表1。

  表1给出配比变量差值的T检验结果,Mean均值之间的差值为-1.78750;Std.Deviation差值的标准差16.10385;Std.ErrorMean差值的调准误为1.80047;95%ConfidenceIntervaloftheDifference置信区间上下限为-5.37124和1.79624;t-valuet值为-0.993;df自由度为79;Sig(2-tailed)双尾T检验的结果,获得t值的概率P值为0.324,检验结果表明酶底物法和平皿计数法检测结果没有统计学意义上的差别(P<0.50)。

  2.2水样检测--线性回归分析

  采集地表水水样进行检测,为保证试验结果的有效性和方便统计,要求检测高、低浓度两个水样,同时,要求低浓度水样的MPN值控制在50MPN/ml左右,高浓度水样的MPN值控制在100MPN/ml左右。由省内6个地区(中山、珠海、佛山、顺德、番禹、南海)和省外3个地区(北京、上海、温州)进行试验,试验结果如图7

  对以上9家实验室用酶底物法和平皿计数法共1160个检测结果进行线性回归统计分析,两种方法线性回归分析见下表2。

 

  由表2知,标准化回归系数Beta为0.95,表明两组数据相关性较好,两种方法的检测结果具有可比性。检验结果P=0.00,均小于0.05,表明两种方法在检测菌落总数时没有显著差异性,具有等效性。此结果说明酶底物法的测定结果准确、可靠,可以替代平皿技术发作为水中菌落总数的测定方法。

  结语

  国际中菌落总数平皿计数法的检测方法自1985年一直沿用至今,该方法因成本低而被广大实验室所接受,但已经不能满足现代的实验室的检测需求。酶底物法则完全弥补了平皿计数法的不足,而且其检测结果与平皿计数法无法统计学意义的差别。

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