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用酶底物法检较脏水样中大肠菌群时的稀释问题
添加时间:2017-03-16
  日常微生物检测中,当面临着水体污染严重的水样检测结果已超出检测限时,这时就需要我们对水样进行稀释。
目前《水与废水标准检测法》、《生活饮用水标准检验方法》中的多管发酵法、滤膜法或是酶底物法,就算是定量范围最大(1-2419MPN/100ml)的酶底物法面对较脏的地下水或者排污口的水样也需要稀释到100倍甚至1000倍。
我们都知道,微生物实验的不稳定性,当我们进行稀释时,结果固然会有影响,我们要做的就是尽量减少误差。
1、实验步骤越少,结果偏差也会越小。所以酶底物法步骤少,会更有优势。
2、在做稀释时,应保证取样量大。譬如10倍稀释:取10ml原液+90ml无菌水配成100ml10倍稀释液①;若是要百倍千倍稀释,则需要进行梯度稀释,由①中的10倍稀释样再取10ml,再加90ml无菌水,此时完成了100倍的稀释。若是千倍稀释,则需要从100倍稀释样中再取10ml进行稀释。
3、每次再去原液时,取样的均匀程度直接影响了后面的稀释结果,故我们在每次取样前必须充分摇匀。
4、为了使数据更加地稳定及接近真实值,建议每个梯度稀释做平行样。这时,我们可以设计成取20ml原液加180ml无菌水配成200ml样或者取30ml加270ml无菌水配成300ml10倍稀释样,以此往下做梯度稀释。若是未知样且浓度可能会很高的时候,我们建议这样去稀释,因为这样我们便可以保证每个梯度至少有一个样。若已经大概了解水样来源及浓度,可直接梯度稀释到我们要的浓度,并做2-3个平行样。
5、对于未知样需要进行浓度的摸索,无论是多管还是酶底物法,都会有较大工作量。前期的梯度稀释及每个梯度做平行样都是无法避免的,当我们后期对水样浓度有了把握后便可以直接稀释到某个浓度,这样就减少许多的工作量了。由于酶底物法是已灭菌可直接用的选择性培养基,比起多管法会更加简便、不用洗大量的管子。另外滤膜法在做脏水时就完全不适合了。
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